In:
Angewandte Chemie, Wiley, Vol. 128, No. 45 ( 2016-11-02), p. 14370-14375
Abstract:
DnaB‐Helikasen sind ATP‐getriebene bakterielle Enzyme, die doppelsträngige DNA während der DNA‐Replikation entwinden. In dieser Arbeit untersuchen wir das sequentielle Binden des “nicht‐hydrolysierbaren” ATP‐Analogons AMP‐PNP und von einfachsträngiger (ss) DNA an die dodekaedrische DnaB‐Helikase von Helicobacter pylori mittels Festkörper‐NMR‐Spektroskopie. Mithilfe von Phosphor‐Kreuzpolarisationsexperimenten wird das Binden von AMP‐PNP und DNA an die Helikase beobachtet, während Veränderungen in den 13 C‐chemischen Verschiebungen (chemical‐shift perturbations, CSPs) Konformationsänderungen des Proteins detektieren. Durch Zugabe von AMP‐PNP geht die Helikase in eine Konformation über, welche ssDNA bindet, wohingegen AMP‐PNP hydrolysiert und bei DNA‐Bindung freigesetzt wird. Unsere Beobachtungen geben Aufschluss über die Konformationsänderungen, die durch Wechselwirkung mit AMP‐PNP ausgelöst werden und die Voraussetzung für das Binden von ssDNA an H. pylori DnaB in vitro sind. Ferner zeigen sie den Grad an Details, welchen die Festkörper‐NMR zur Charakterisierung von Protein‐DNA‐Wechselwirkungen und dem Zusammenspiel mit ATP oder seinen Analoga zu liefern vermag.
Type of Medium:
Online Resource
ISSN:
0044-8249
,
1521-3757
DOI:
10.1002/ange.v128.45
DOI:
10.1002/ange.201607295
Language:
English
Publisher:
Wiley
Publication Date:
2016
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505868-5
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