In:
Angewandte Chemie, Wiley, Vol. 133, No. 44 ( 2021-10-25), p. 24087-24096
Abstract:
Die räumliche und zeitliche Kontrolle der Aktivität von CRISPR‐assoziierten (Cas‐)Proteinen ist von großem Interesse für Grundlagenforschung und Therapie. Hier zeigen wir, dass schaltbare “Guide‐RNAs” (gRNAs) für Cas12a mithilfe von RNA‐Polymerase II in Säugetierzellen transkribiert werden können. Darauf folgt eine Aktivierung durch Input‐abhängige Prozessierung des 3′‐Endes des gRNA‐Transkripts. Wir demonstrieren diese Prozessierung durch einen RNA‐Strangverdrängungsmechanismus, eine microRNA‐abhängige Verarbeitung sowie via Abspaltung durch ein auf Guanin reagierendes Ribozym. Des Weiteren zeigen wir, dass Cas12a zusammen mit mehreren unabhängig schaltbaren gRNAs kompakt auf einem einzelnen Transkript integriert werden kann, indem stabilisierende RNA‐Triplexe verwendet werden. Dies ebnet einen Weg zu Cas12a‐basierten Konstrukten für die Genregulation mit Multi‐Input‐Schaltfähigkeit. Wir zeigen mithilfe von Lumineszenz und Fluoreszenz, dass dieses Prinzip in HEK‐ und Maus‐Fibroblastenzellen funktioniert und sich auch zur schaltbaren Hochregulierung eines endogenen Gens nutzen lässt.
Type of Medium:
Online Resource
ISSN:
0044-8249
,
1521-3757
DOI:
10.1002/ange.v133.44
DOI:
10.1002/ange.202107258
Language:
English
Publisher:
Wiley
Publication Date:
2021
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